摘要：【目的】營養(yǎng)期殺蟲蛋白Vip3A是一種由蘇云金芽孢桿菌在對數(shù)生長期產(chǎn)生的新型殺蟲毒素.Vip3A與敏感昆蟲中腸上皮細胞的結(jié)合是其發(fā)揮殺蟲活性的關(guān)鍵步驟.為進一步探究Vip3A毒素的殺蟲機理,研究Vip3Aa10與甜菜夜蛾刷狀緣膜囊泡(BBMVs)的結(jié)合特性.【方法】在大腸桿菌中用IPTG誘導表達Vip3Aa10,用親和層析和離子交換層析的方法純化蛋白,并用胰蛋白酶活化Vip3Aa10,得到Vip3Aa10-T.然后分析Vip3Aa10前毒素和Vip3Aa10-T對甜菜夜蛾的殺蟲活性,用免疫印跡法和配體印跡法分析Vip3Aa10-T與甜菜夜蛾BBMVs的結(jié)合特性以及在甜菜夜蛾BBMVs上的結(jié)合蛋白.【結(jié)果】Vip3Aa10-T與Vip3Aa10前毒素對甜菜夜蛾的殺蟲活性很高.Vip3Aa10-T在pH8.0時更容易與甜菜夜蛾BBMVs結(jié)合,并且能夠與非敏感性昆蟲黃粉蟲BBMVs結(jié)合.在相同pH條件下,Vip3Aa10前毒素比Vip3Aa10-T更容易與甜菜夜蛾BBMVs結(jié)合.Vip3Aa10-T在甜菜夜蛾BBMVs上有4條結(jié)合蛋白,其分子量分別為80、38、31和22kDa.【結(jié)論】活化的Vip3Aa10與甜菜夜蛾BBMVs的結(jié)合是pH依賴性的,并且能與BBMVs上的4個蛋白結(jié)合.