摘要：目的研究應(yīng)用RNA干擾技術(shù)進(jìn)行抑制胃癌SGC-7901細(xì)胞COX-2的表達(dá)研究。方法依據(jù)siRNA設(shè)計(jì)原則，針對人COX-2的mRNA序列，設(shè)計(jì)并合成3條21bp的雙鏈RNA，瞬時轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞SGC-7901，Western印跡t驗(yàn)證基因沉默效率以篩選合適的siRNA序列；根據(jù)篩選出的有效序列，合成編碼短發(fā)卡RNA的雙鏈寡核苷酸，定向克隆到含有U6RNA聚合酶Ⅲ啟動子的pSilencer^TM2．1-U6neo真核表達(dá)載體，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染胃癌細(xì)胞SGC-7901中，經(jīng)G418篩選，獲得克隆細(xì)胞。結(jié)果篩選出一條有效的干擾序列，位于291—311bp，成功構(gòu)建表達(dá)載體，COX-2在蛋白水平的表達(dá)明顯被抑制。結(jié)論利用化學(xué)合成siRNA進(jìn)行初篩，再構(gòu)建shRNA表達(dá)載體，可快速實(shí)現(xiàn)目的基因的表達(dá)抑制。