摘要：本研究利用Red/ETDNA重組技術(shù)對(duì)實(shí)驗(yàn)室已有的含鼠李糖基轉(zhuǎn)移酶基因RhlAB的分泌表達(dá)載體pBBR1-genta-RhlAB進(jìn)行修飾,將3種不同強(qiáng)度組成型啟動(dòng)子(Papra、Ptac和PrhaB)成功替換了RhlAB基因在銅綠假單胞菌中的原始啟動(dòng)子,成功獲得了表達(dá)載體pBBR1-genta-Papra-RhlAB,pBBR1-kan-Ptac-RhlAB和pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB,并將這些表達(dá)載體分別在防御假單胞菌Pf-5中異源表達(dá),通過LB培養(yǎng)基發(fā)酵42h后,Pf-5/pBBR1-genta-RhlAB的鼠李糖脂產(chǎn)量為17.56mg/L,而Pf-5/pBBR1-genta-Papra-RhlAB,Pf-5/pBBR1-kan-Ptac-RhlAB和Pf-5/pBBR1-kan-PrhaB-RhlAB分別是11.135mg/L,441.135mg/L,557.764mg/L,啟動(dòng)子優(yōu)化后產(chǎn)量分別是原始啟動(dòng)子的0.63,25.12和31.76倍。對(duì)發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析,共檢出相對(duì)含量變化的4類質(zhì)核比不同的鼠李糖脂同系物。并通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)RhlAB基因的表達(dá)量,發(fā)現(xiàn)啟動(dòng)子替換為Ptac和PrhaB后RhlAB基因表達(dá)量分別是原始啟動(dòng)子的2.16和2.77倍。本研究初步實(shí)現(xiàn)了RhlAB基因在Pf-5中的表達(dá),發(fā)現(xiàn)組成型啟動(dòng)子Ptac和PrhaB比RhlAB的原始啟動(dòng)子表達(dá)效率更高,可為異源合成鼠李糖脂提供重要參考。