摘要：克隆與分析四倍體野生種花生的Ty1-copia類逆轉(zhuǎn)座子逆轉(zhuǎn)錄酶基因序列,可為研究其轉(zhuǎn)錄活性、功能及調(diào)控提供序列基礎(chǔ)。使用根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)的簡(jiǎn)并引物對(duì),利用PCR技術(shù)對(duì)四倍體野生種花生(Arachis monticola)的基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增,經(jīng)回收、克隆和測(cè)序,對(duì)目的序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果顯示,目的條帶大小約260 bp,克隆獲得了32條逆轉(zhuǎn)錄酶序列,序列長(zhǎng)度范圍為257~269 bp,A+T所占比例范圍為54.47%~68.77%,A+T與G+C比例為1.20~2.20。核苷酸序列間相似性范圍為46.4%~98.9%,存在較高異質(zhì)性,表現(xiàn)為缺失突變與點(diǎn)突變;氨基酸序列間相似性范圍為6.3%~100%,有12條序列發(fā)生了終止密碼子突變,呈現(xiàn)高度異質(zhì)性。絕大部分序列的保守基序一致,但各序列間的保守基序也存在一定差異,呈現(xiàn)一定程度的異質(zhì)性。32條序列系統(tǒng)聚類為4個(gè)家族,家族Ⅰ和家族Ⅲ分別占總序列數(shù)的31.25%和37.50%。對(duì)四倍體野生種花生與其它物種植物同一類型逆轉(zhuǎn)錄酶的氨基酸序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育進(jìn)化樹,結(jié)果顯示所有序列被分為6類,其中,Ⅰ類和Ⅱ類分別包含15條和9條四倍體野生種花生逆轉(zhuǎn)錄酶序列,表明四倍體野生種花生逆轉(zhuǎn)錄酶序列具有比較高的保守性;同時(shí)四倍體野生種花生逆轉(zhuǎn)錄酶序列與葡萄、擬南芥、馬鈴薯、野茶樹、辣椒、甜菜、煙草、番茄、綠豆以及歐洲云杉等具有較近的親緣關(guān)系,表明它們之間可能存在橫向傳遞。本研究獲得的逆轉(zhuǎn)錄酶序列為基于LTR逆轉(zhuǎn)座子的花生屬分子標(biāo)記開發(fā)和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。