摘要：本研究以本實(shí)驗(yàn)室曾在酒曲、酒糟、窖泥等樣品中分離的具有醬香味的13株菌株作為出發(fā)菌株,經(jīng)脫脂奶粉平板、纖維蛋白雙層平板篩選出纖溶酶活性最高的菌株GZHZ V-8 ,結(jié)合形態(tài)學(xué)特征、生理生化特征及16S rDNA序列同源性分析,GZHZ V-8 菌株為解淀粉芽孢桿菌( Bacillus amyloliquefaciens )。以GZHZ V-8 菌株總DNA為模板擴(kuò)增出纖溶酶基因的編碼區(qū),與pMD18-T載體連接、轉(zhuǎn)化至大腸桿菌( Escherichia coli ) DH5α,分析表明纖溶酶基因開(kāi)放閱讀框包含1092 bp堿基,編碼363個(gè)氨基酸。纖溶酶基因與表達(dá)載體pET-22b(+)連接轉(zhuǎn)化至 E.coli BL21中表達(dá),表達(dá)菌株經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)分泌活性纖溶酶,培養(yǎng)后測(cè)得發(fā)酵上清液、菌體細(xì)胞破碎上清液和菌體細(xì)胞破碎沉淀的纖溶酶活力分別為613.26 IU/mL、407.38 IU/mL、993.12 IU/mL。