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樹鼩Mfsd2a基因的克隆分析和不同組織表達量的檢測

王文廣; 匡德宣; 李娜; 陸彩霞; 罕園園; 仝品芬; 孫曉梅; 代解杰 中國醫學科學院/北京協和醫學院醫學生物學研究所樹鼩種質資源中心、云南省重大傳染病疫苗研發重點實驗室、中國醫學科學院醫學生物學研究所實驗樹鼩標準化與應用研究省創新團隊; 昆明650118
  • 樹鼩
  • 克隆
  • 分析
  • 表達

摘要:目的對樹鼩主要促進因子超家族成員2a(Mfsd2a)基因進行克隆、測序和生物信息學分析,并定量檢測其組織表達量。方法從樹鼩腦和脊髓中提取總RNA,RT-PCR擴增Mfsd2a基因片段,測序后利用生物信息學軟件對其序列特征、系統進化、編碼蛋白的結構和理化性質進行分析;以樹鼩β-actin為內參,qPCR檢測樹鼩Mfsd2a基因在不同組織中的表達情況。結果克隆獲得Mfsd2a基因片段全長1 796 bp,與NCBI上公布的樹鼩Mfsd2a基因預測序列高度一致,比對顯示其與MFS轉運蛋白超家族同源。其編碼區全長1 464 bp,編碼488個氨基酸。預測結果顯示樹鼩Mfsd2a蛋白具有明顯的疏水性區域,無信號肽,二級結構元件由α螺旋、β折疊、無規卷曲和延伸鏈組成。OCTOPUS分析發現Mfsd2a存在12個跨膜結構,修飾結構預測發現Mfsd2a蛋白存在兩處N糖基化位點,亞細胞定位發現其可能主要分布于細胞膜和內質網。qPCR檢測樹鼩不同組織的Mfsd2a表達,結果顯示各組織均有表達,在大腦、脊髓中的表達水平相對較高。結論成功克隆了樹鼩Mfsd2a基因,建立了該基因表達定量檢測方法,為今后利用樹鼩神經系統疾病模型深入開展Mfsd2a基因功能研究提供了理論和技術支持。

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實驗動物與比較醫學

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  • 醫學 快捷分類
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