摘要：目的探討miR-25-3p靶向解整合素金屬蛋白酶10(ADAM10)調控Notch信號通路對P19細胞向心肌細胞分化的影響。方法采用二甲基亞砜(DMSO)誘導P19細胞向心肌細胞分化,分別收集誘導分化第0、5、10天的細胞,實時熒光定量PCR檢測誘導分化過程中心肌分化標志物GATA結合蛋白4(GATA4)、心肌肌鈣蛋白T(cTnT)、心房利鈉尿多肽(ANP)的mRNA以及miR-25-3p水平, Western blot法檢測誘導分化過程中ADAM10蛋白水平。通過逆轉錄病毒感染P19細胞過表達miR-25-3p,采用實時熒光定量PCR檢測感染后P19細胞中miR-25-3p水平, Western blot法檢測感染后P19細胞ADAM10蛋白水平。生物信息學軟件預測并通過熒光素酶報告實驗驗證miR-25-3p與ADAM10之間的靶向結合作用。感染后的P19細胞經DMSO誘導分化10d后,免疫熒光實驗檢測細胞中心肌肌鈣蛋白I(cTnI)蛋白的表達情況,并計算心肌細胞分化率;Western blot法檢測GATA4、cTnT、ANP以及Notch信號通路相關蛋白Notch1、Hes家族bHLH轉錄因子1(Hes1)、Hairy相關轉錄因子1(Hey1)和Hey2蛋白水平。結果P19細胞向心肌細胞誘導分化的第0、5、10天過程中, GATA4、cTnT、ANP的mRNA水平及ADAM10蛋白水平均逐漸增加,而miR-25-3p水平逐漸降低;逆轉錄病毒感染后, P19細胞中miR-25-3p水平顯著增加,而ADAM10蛋白水平顯著降低;生物信息學分析證實ADAM10為miR-25-3p的靶基因;誘導分化10 d后,過表達miR-25-3p可顯著降低心肌細胞分化率,下調GATA4、cTnT、ANP及Notch信號通路相關分子Notch1、Hes1、Hey1和Hey2的蛋白水平。結論miR-25-3p可顯著抑制P19細胞向心肌細胞分化,其機制可能與其靶向抑制ADAM10表達,進而抑制Notch信號通路的激活有關。