摘要：借助自主研發(fā)的深海水體原位定植培養(yǎng)系統(tǒng),在南海3300m的深海水體中進(jìn)行了氮循環(huán)微生物的原位培養(yǎng).通過向富集倉中投加緩釋肥(銨鹽、硝酸鹽和尿素)進(jìn)行了為期17個月的原位富集.結(jié)合高通量測序技術(shù)和分離培養(yǎng)的方法,對深海原位富集物及實(shí)驗(yàn)室二次富集物進(jìn)行了微生物多樣性分析.16SrRNA基因高通量測序結(jié)果表明,在南海原位富集樣品中,細(xì)菌以變形菌門豐度最高,富集倉內(nèi)脫脂棉附著介質(zhì)和倉內(nèi)水樣中的最優(yōu)勢屬分別為希瓦氏菌屬(Shewanella)和科韋爾氏菌屬(Colwellia);古菌以奇古菌門為主,其中氨氧化古菌(AOA)所占比例很高.通過平板培養(yǎng)分離到17株細(xì)菌,主要包括鹽單胞菌屬(Halomonas)、海桿菌屬(Marinobacter)和亞硫酸鹽桿菌屬(Sulfitobacter)等.通過不同起始氮源(氨氮、硝酸鹽、亞硝酸鹽)和培養(yǎng)溫度(28℃和10℃),對原位富集樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室二次富集,獲得了5個富集菌群.分析發(fā)現(xiàn),它們均具有較好的脫氮效果,可以產(chǎn)生N2O或N2;這些菌群均以鹽單胞菌屬占絕對優(yōu)勢,其次為海源菌屬(Idiomarina)或海桿菌屬,其中鹽單胞菌和海源菌成功獲得分離.單菌功能驗(yàn)證表明,分離獲得的鹽單胞菌具有好氧反硝化能力,其在原位環(huán)境下反硝化活性尚有待確認(rèn).