摘要：目的制備促黃體激素釋放激素(luteinizing hormone releasing hormone,LHRH)-TAT-p53融合蛋白,探討其抗腫瘤作用。方法以重組質(zhì)粒pET28a-p53為模板,經(jīng)PCR擴(kuò)增目的基因,雙酶切,克隆至原核表達(dá)載體p ET20b中,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p ET20b-LHRH-TAT-p53,并在E. coli中IPTG誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)金屬螯合層析、DEAE弱陰離子交換層析純化目的蛋白。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HeLa、BGC及MDCK細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞活性試驗(yàn),檢測(cè)pET28a-p53蛋白活性。結(jié)果經(jīng)雙酶切及測(cè)序鑒定,重組質(zhì)粒pET20b-LHRH-TAT-p53構(gòu)建正確;融合蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約54 000,主要以包涵體形式存在,表達(dá)量約占菌體總蛋白55%;HeLa及BGC細(xì)胞加入純化復(fù)性的重組蛋白后,細(xì)胞變圓、色暗、折光性變差,甚至裂解死亡,細(xì)胞死亡數(shù)增加,而MDCK細(xì)胞無變化;一定濃度范圍內(nèi)(25~120μg/m L)蛋白對(duì)HeLa及BGC細(xì)胞有明顯的抑制作用。結(jié)論成功制備了LHRH-TAT-p53融合蛋白,該蛋白具有生物活性,對(duì)腫瘤細(xì)胞有殺傷作用。本研究為下一步制備靶向LHRH的腫瘤治療藥物提供了參考。