豬偽狂犬病病毒IgA抗體間接ELISA檢測方法的建立

黃雨晴; 華濤; 唐波; 常晨; 劉國陽; 張雪花; 盧宇; 侯繼波; 張道華; 許家榮南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院; 江蘇南京210095; 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動物免疫工程研究所; 江蘇南京210014; 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院國家獸用生物制品工程技術(shù)研究中心; 江蘇南京210014; 省部共建國家重點實驗室培育基地—江蘇省食品質(zhì)量安全重點實驗室; 江蘇南京210014; 江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心; 江蘇揚州225009

偽狂犬病病毒
gb基因
原核表達
iga
間接elisa

摘要：為了建立檢測豬偽狂犬病病毒(PRV)黏膜免疫時特異的IgA抗體的間接ELISA方法,本研究采用PCR方法擴增了PRV gB基因截短片段,并將其連入原核表達質(zhì)粒pGEX-6P-1,構(gòu)建的表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌Transetta(DE3)菌株后,采用IPTG進行誘導(dǎo)表達,得到gB重組蛋白的可溶性表達,并用谷胱甘肽親和層析柱進行蛋白純化。以純化的gB重組蛋白作為包被抗原,以山羊抗豬IgA-HRP為二抗,建立了豬偽狂犬病病毒IgA的間接ELISA檢測方法。經(jīng)ELISA反應(yīng)條件優(yōu)化,確定抗原包被濃度為2.4 g/mL,封閉液為10 g/L明膠,一抗37℃孵育1.5 h,二抗1∶20000稀釋后37℃孵育0.5 h,TMB顯色液顯色10 min。該方法的批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于10%,重復(fù)性較好。利用該間接ELISA方法對PRV黏膜免疫的仔豬進行檢測,結(jié)果可以在鼻腔黏液中檢測出特異的IgA抗體。本試驗為PRV黏膜免疫提供了初步檢測方法。

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