摘要：為研究dnaJ基因序列與細菌致病力的關系,本研究構建了dnaJ基因缺失株和互補株,并對其致病性進行驗證。參照GenBank中無乳鏈球菌GD201008-001(登錄號:NC_018646)目的基因序列分別設計引物,PCR克隆dnaJ基因上、下游同源臂基因序列,通過融合PCR將兩個片段連接到一起,構建dnaJ基因上、下游同源臂融合片段,PCR克隆含有啟動子序列的dnaJ基因。將dnaJ基因上、下游同源臂融合片段和含有啟動子序列的dnaJ基因分別連接鏈球菌-大腸桿菌穿梭質粒pSET4s和pSET2,電轉化GD201008-001感受態細胞,構建dnaJ基因缺失株ΔdnaJ和互補株CΔdnaJ。通過分析ΔdnaJ和CΔdnaJ的遺傳穩定性與形態學變化對dnaJ上、下游基因轉錄的影響,以及生長速率和斑馬魚攻毒試驗評價dnaJ基因對無乳鏈球菌毒力的影響。經PCR鑒定和測序證明,ΔdnaJ和CΔdnaJ構建成功;與野生株GD201008-001相比,ΔdnaJ和CΔdnaJ在細菌染色形態上均無明顯差異,但ΔdnaJ在液體培養基中的生長速度明顯減緩;dnaJ基因的缺失未對相鄰基因的轉錄造成影響;ΔdnaJ對斑馬魚的毒力明顯下降,對斑馬魚的LD 50為5.68×10 4 CFU,約是野生株的241倍。dnaJ基因對無乳鏈球菌的毒力有顯著影響,本試驗結果為進一步探究無乳鏈球菌dnaJ基因的功能提供了參考依據。