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篇(1)

論文關鍵詞：測試瓶法，細菌總數，景觀水

景觀水常規水質檢測指標主要包括CODCr、NH3-N、TP、BOD、葉綠素-a、濁度、透明度、水溫、細菌總數等多項。微生物指標能夠顯示水體的不同污染程度，在水體修復過程中有重要參考價值。本試驗以景觀河道等水樣為主要檢測對象，考察細菌總數指標，選取合適的分析方法，并在一定程度上反映受污染水體在生物修復過程中微生物的含量變化。

目前細菌總數的主要測定方法有平皿計數法、最可幾率法（MPN）、光學顯微鏡計數法、熒光顯微鏡計數法、渾濁度計數法、電阻抗法等[1]。其中成本較低且廣泛應用于水中細菌總數測定的為平皿計數法和MPN法。平皿計數法操作繁瑣，全程需無菌條件，環境及人為因素對測定結果影響較大；MPN法操作相對簡便，二者對于現場取樣的景觀水體均存在不能在野外現場進行快速檢測的缺點。而同樣采用絕跡稀釋法原理制備的測試瓶法制作簡單，攜帶方便，能夠于取樣現場操作。測試瓶可提前數天大量制備，隨時取用生物論文，避免了一般測試方法冗長的準備時間。該法原用于石油天然氣行業標準中的油田注入水細菌分析（SY/T 0532-93），已經有文獻報道，采用不同培養基制成的針對冷卻水中硫酸鹽還原菌[2]、鐵細菌[3]，以及產表面活性劑菌[4]、黃原膠降解菌[5]等不同菌種的測試瓶，經驗證與MPN法測定結果完全或接近一致。

1 試驗方法

1.1 測試瓶的制備

在水體表層光線穿透的地方存活有藻類和光合細菌，制造氧氣，因此有氧淺水層生活著大量的好氧細菌，氧氣濃度較低的水層主要是兼氧細菌，只有在深水層和底泥中有各種厭氧細菌。河道、湖泊等景觀水取樣時一般在表層深約0.3-0.5 m處，主要含好氧細菌，培養基的選擇以培養好氧菌為主免費論文。

參考平皿計數法中培養細菌所用的牛肉膏蛋白胨培養基[6]，除去起固化作用的瓊脂組分制成液態培養基。由于沒有一種單獨的培養基能夠滿足某一水樣中所有種類細菌生長所需的生理條件，因此該培養基培養所測得的細菌總數實際上要小于被測水樣中真正存在的細菌數目，且培養獲得的應為活菌總數。

取牛肉膏 3 g，蛋白胨 10 g，NaCl 5 g，用10% NaOH 調整pH至7.0-7.2，溶于1000 mL水中，若有渾濁可過濾。選取容量約12 mL的細菌培養瓶，用定量加液器注入9 mL液體培養基，橡膠蓋鋁箔密封后在121±1℃下滅菌半小時。

1.2 測試方法

粗略估計待測樣的細菌總數，選取合適的測試瓶數量并編號，可同時測定平行樣。用無菌注射器取1 mL待測樣生物論文，注入1號瓶，搖勻得1:10稀釋濃度；另取一支無菌注射器從1號瓶內取1 mL液體注入2號瓶，搖勻得1:100稀釋濃度；取第三支無菌注射器從2號瓶內取1 mL液體注入3號瓶，搖勻得1:1000稀釋濃度，以此類推，根據需要而重復取樣稀釋過程。將培養瓶置于37℃恒溫培養箱內培養。

圖1 測試瓶法示意圖

Fig.1 Test-bottle Schematic

培養完畢后觀察，培養液成云狀渾濁則表示有細菌生成。1號瓶有細菌生成則細菌總數為1-10個/mL；2號瓶有細菌生成則細菌總數為10-102個/mL。直至第n個測試瓶出現渾濁，而第n+1個測試瓶中培養基仍保持澄清狀態，則細菌總數為10n-1-10n個/mL，由此可得樣品中最大可能細菌總數。若要得到更準確的結果，可進行平行試驗，以相應的數量指標查計數統計表[7, 8]得到細菌總數的近似值。

2 測試結果分析

2.1測試瓶法培養時間的確定

平皿計數法中細菌培養時間為37℃恒溫下24 h，MPN法及文獻報道的測試瓶法中根據測試菌種的不同而確定7-15d的培養時間。選取4組不同水樣，每組6個不同稀釋度，每天觀察每組樣品中出現渾濁的測試瓶個數，直至結果保持穩定。

由表1可知，接種后的1-2 d，細菌處于生長階段，第3天直至第7天內不再有新的測試瓶出現渾濁現象，即細菌總數不再發生變化，故可認為培養時間為1-2 d。在實際操作中，相比于其他需要數天長期培養觀察的方法大幅度縮短時間，更適宜于實際應用生物論文，可更好的針對現象及時采取處理措施，獲得最佳效果。

表1 培養時間分析結果

Tab.1 Culture Time Analysis

試驗序號

出現渾濁的測試瓶數/個

穩定期/d

1 d

2 d

3 d

4 d

5 d

6 d

7 d

1

4

5

5

5

5

5

5

2

2

4

5

5

5

5

5

5

2

3

2

4

4

4

4

4

4

2

4

3

3

3

3

3

3